Prinsip Mikroskop Elektron Transmisi EM
Persiapan spesimen: Sel dikenakan langkah-langkah berikut untuk menyiapkan sampel yang sangat tipis (20 hingga 100 nm tebal)
- Fiksasi: Sel difiksasi menggunakan glutaraldehid atau osmium tetroksida untuk stabilisasi.
- Dehidrasi: Spesimen kemudian didehidrasi dengan pelarut organik (mis. Aseton atau etanol).
- Embedding: Spesimen tertanam dalam polimer plastik dan kemudian, dikeraskan untuk membentuk blok padat. Sebagian besar polimer plastik tidak larut dalam air; maka dehidrasi lengkap spesimen harus dilakukan sebelum penanaman.
- Mengiris: Spesimen kemudian dipotong menjadi irisan tipis dengan pisau ultramicrotome, dan irisan dipasang pada slide logam (tembaga).
Teknik pembekuan-beku: Ini adalah metode alternatif untuk persiapan spesimen untuk memvisualisasikan organel internal dalam sel. Sel-sel dibekukan dengan cepat lalu dihangatkan
- retak oleh pisau yang mengekspos organel internal → mengalami sublimasi
- dibayangi oleh lapisan dengan platinum dan karbon.
Langkah-langkah untuk meningkatkan kontras EM meliputi:
- Pewarnaan dengan larutan garam logam berat seperti timbal sitrat dan uranil asetat
- Pewarnaan negatif dengan logam berat seperti asam fosfotungstik atau uranil asetat.
- Pembayangan: Spesimen dilapisi dengan film tipis dari platinum atau logam berat lainnya pada sudut 45 ° sehingga logam tersebut menyerang mikroorganisme hanya pada satu sisi
Mikroskop elektron:
- > 100.000 pembesaran
- Resolusi 0,5 nm
- Sumber radiasi - Berkas elektron
- media vakum tinggi
- Spesimen dipasang pada kisi Logam
- Lensa elektromagnet