Apa fungsi teknik pewarnaan pada mikroskop adalah

Pewarnaan diperlukan untuk menghasilkan kontras warna dan dengan demikian meningkatkan visibilitas objek.

Sebelum pewarnaan, fiksasi apusan ke slide dilakukan:

  • Fiksasi panas biasanya dilakukan untuk apusan bakteri dengan memanaskan film bakteri kering dengan lembut
  • Fiksasi kimia seperti etanol, asam asetat, merkuri klorida, formaldehida, metanol, dan glutaraldehida. Ini berguna untuk pemeriksaan apusan darah.

Teknik Pewarnaan Digunakan dalam Mikrobiologi

1. Noda sederhana: Pewarna dasar seperti metilen biru atau fuchsin dasar digunakan sebagai noda sederhana. Mereka memberikan kontras warna, tetapi memberikan warna yang sama untuk semua bakteri dalam apusan.

2. Pewarna negatif, mis. Tinta India atau nigrosin. Latar belakang menjadi hitam pekat sedangkan bakteri yang tidak ternoda berbeda. Ini sangat berguna dalam demonstrasi kapsul bakteri yang tidak mengambil noda sederhana.

3. Metode impregnasi (mis. Perak): Digunakan untuk demonstrasi struktur tipis seperti flagela bakteri dan spirochetes

4. Noda diferensial: Dua noda digunakan yang memberikan warna berbeda yang membantu membedakan bakteri, mis.

• Noda Gram: Membedakan bakteri menjadi kelompok Gram-positif (tampak ungu) dan Gram-negatif (tampak merah muda)

○ Noda primer dengan kristal violet (atau gentian violet atau metyl violet) selama satu menit.
○ Mordant oleh yodium Gram selama satu menit.
○ Dekolorisasi dengan aseton (selama 1-2 detik) atau etanol (20-30 detik) dengan segera dicuci. 

Decolorizer menghilangkan noda primer dari bakteri Gram-negatif sementara bakteri Gram-positif mempertahankan pewarna primer.

○ Noda pencacah atau Noda sekunder dengan safranin atau carbol fuchsin encer; ditambahkan selama 30 detik.

• Noda tahan asam: Organisme tahan asam (tabel di bawah) menahan dekolorisasi menjadi asam mineral. Ini disebabkan oleh adanya asam mikolik di dinding sel.
• Noda Albert: Membedakan bakteri yang memiliki butiran metakromatik (mis. Corynebacterium diphtheriae) dari bakteri lain yang tidak memilikinya.

5. Metode Pewarnaan Khusus Lainnya:
  • Pewarna spora: Pewarnaan cepat asam (menggunakan asam sulfat 0,25%) dan pewarna hijau Malachite (metode Schaeffer dan fulton dimodifikasi oleh Ashby) digunakan; Namun, mikroskop kontras fase film basah tidak bernoda adalah metode terbaik.
  • Lipid ternoda oleh: Noda hitam Sudan
  • Karbohidrat (Glikogen) ternoda oleh pewarnaan yodium
  • Noda flagel: Pewarnaan asam tanat (metode Leifson)

6. Mikroskopi Bakteri dalam Keadaan Hidup

• Persiapan tidak basah (basah): Digunakan untuk:
  •  Memeriksa motilitas bakteri (mis. Dalam persiapan drop-drop dan wet mount)
  • Untuk demonstrasi spirochetes (mis. Dalam bidang gelap atau mikroskop fase kontras).


• Noda vital: Membedakan sel hidup dari sel mati:
  • Pada pewarnaan supravital, sel-sel hidup yang telah dikeluarkan dari suatu organisme ternoda; sedangkan pewarnaan intravital dilakukan dengan menyuntikkan noda ke dalam tubuh.
  • Contoh noda vital adalah eosin, propidium iodida, tripan biru, eritrosin, dan merah netral.